1. 含無機(jī)鹽緩沖液與高比例有機(jī)溶劑（如乙腈、甲醇）不可直接混合

比如：磷酸緩沖液、醋酸鈉緩沖液、硫酸鉀緩沖液等 與乙腈、甲醇直接混合，當(dāng)有機(jī)相比例高于50%甚至更高時，許多無機(jī)鹽溶解度極低，會迅速析出沉淀。

沉淀會堵塞色譜柱、進(jìn)樣器、管路和泵，造成設(shè)備損壞。

實驗中若需混合，必須確保無機(jī)鹽在有機(jī)相中的溶解度，并一般推薦總有機(jī)相比例低于30%。

2. 強(qiáng)酸和強(qiáng)堿流動相不能混用

如含鹽酸、磷酸的流動相與含氫氧化鈉、氨水的流動相混合，可能發(fā)生中和或沉淀反應(yīng)（如磷酸鈣、磷酸鎂沉淀）。

不但影響分離效果，還會損壞色譜柱的填料和管路。

3. 含金屬離子的緩沖液與含硫化物或鹵素類試劑不可混用

易生成難溶沉淀（如AgCl、CuS），導(dǎo)致管路和柱堵塞。

4. 不同有機(jī)溶劑混合前要注意互溶性和比例

如乙腈、甲醇、異丙醇等一般互溶，但高濃度或混合其它成分（如緩沖鹽），有時會出現(xiàn)微相分離或析晶現(xiàn)象。

5. 醋酸銨、甲酸銨、三乙胺等緩沖劑在高比例異丙醇等有機(jī)溶劑中溶解度低

使用時應(yīng)查詢?nèi)芙舛?，否則高比例有機(jī)相下可能形成析出。

6. 部分流動相在強(qiáng)度變化或系統(tǒng)沖洗時也容易出現(xiàn)問題

比如用磷酸鹽緩沖液的方法分析后，直接用純乙腈沖洗系統(tǒng)，易在管路或接口處產(chǎn)生鹽析。

應(yīng)先用純水洗去鹽，再用有機(jī)溶劑沖洗。

典型不能混用組合舉例

流動相A 流動相B 現(xiàn)象/問題

磷酸鹽緩沖液 乙腈、甲醇 鹽沉淀，堵塞系統(tǒng)

醋酸鈉緩沖液 乙腈、高異丙醇 鹽沉淀

鹽酸或磷酸 氫氧化鈉/氨水 沉淀、pH急劇變化

金屬離子緩沖液 含硫試劑、鹵素 難溶金屬鹽沉淀

醋酸銨、甲酸銨 高比異丙醇、有機(jī)溶劑 緩沖劑低溶解度沉淀