火腿中胭脂紅和誘惑紅檢測的固相萃取方法             
  (菲羅門專用的食品中色素提取分析 Polyclean X-PAmide 小柱)

一、實驗目的

本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC 法作為分析方法，檢測火腿中胭脂紅和誘惑紅的含量。
該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。

二、實驗目標物

胭脂紅(CAS:569-64-2)，誘惑紅(CAS: 25956-17-6)。

三、應用范圍

本方法適用于火腿或者豬肉中多種合成著色劑的檢測的 HPLC 檢測及確證。

四、實驗材料

NuAnalytical Polyclean X-PAmide 小柱 500mg/6mL(9B-P006-06500)。

五、實驗方法
1、樣品提取

準確稱取粉碎好的火腿 10.0 g 于 50 mL 離心管中，加入 30 mL 氨化乙醇溶液（氨水：乙醇：水=20:70:10），  渦旋 1 min，4000 r/min 離心 5 min，上清液轉(zhuǎn)移至 100 mL 雞心瓶中,50 ℃ 旋蒸至 2 mL 左右（注意容易暴沸），轉(zhuǎn)移至 15 mL 離心管中，加入水至 10 mL。樣品溶液待凈化。

2、SPE 柱凈化

(1)活化：Polyclean X-PAmide 小柱使用前用 6 mL 甲醇、6 mL 水活化。（使用固相萃取裝置，流速 1-2 滴/秒。）

(2)上樣和洗脫：在 Polyclean X-PAmide 小柱上加入 10 mL 待凈化樣品，控制流速在 1-2 滴/秒，棄去流出液。依次用 6 mL 甲醇、6 mL 水淋洗，棄去流出液，抽干。然后用 6 mL 5%

氨化甲醇進行洗脫，控制流速在 1-2 滴/秒，收集洗脫液。

(3)重新溶解：洗脫液于 45 ℃氮吹至干，加 1 mL 水定容，混勻，過 0.45 μm 水系濾膜（注意防止不合適的濾膜吸附一定量的色素而造成損失），待上機測試。

3、HPLC 條件

設(shè)     備：Waters Alliance 2690

色譜柱 ：Neptune C18 (4.6×250 mm, 5 μm) 檢測器 ：Waters 2487 紫外檢測器

流動相：A：甲醇         B：0.02mol/L 乙酸銨緩沖溶液洗脫方式：梯度洗脫

表 1 梯度洗脫條件

時間/min	A%	B%
--	5	95
3	20	80
10.00	60	40
13.00	60	40
15.00	5	95
18.00	5	95

流速：1.0 mL/min 檢測波長：254 nm 進樣體積：20 μL 六、實驗結(jié)果

1、0.2 mg/kg 火腿中胭脂紅和誘惑紅的添加回收結(jié)果

表 2   0.2 mg/kg 火腿中胭脂紅和誘惑紅的添加回收結(jié)果