以下方案都是成功的客戶端較好方案，因各種涉密性問題，不便獲得圖譜，如果您使用后，可以公開圖譜，也將獲得一份獎(jiǎng)勵(lì)！
方案一
樣品前處理凈化后，能照AOAC用Polyclean X-MAX 60mg/3ml.
HPLC測(cè)定：
色譜柱：Titank C18 5μ 250 × 4.6 mm（貨號(hào)：FMG-5560-E0NU）
流動(dòng)相：0.1 M KH2PO4溶液（用KOH溶液調(diào)節(jié)pH值至5.6）為流動(dòng)相A；甲醇為流動(dòng)相B
流速：0.5 mL/min
檢測(cè)波長：260 nm
溫度：40℃
梯度：
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時(shí)間(分鐘) |
流動(dòng)相A(%) |
流動(dòng)相B(%) |
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0 |
100 |
0 |
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5 |
100 |
0 |
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14 |
90 |
10 |
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15 |
80 |
20 |
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35 |
80 |
20 |
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36 |
100 |
0 |
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50 |
100 |
0 |
方案二
不同的樣品凈化方法，采用反相SPE模式分離，與方案一中離子交換模式比較，對(duì)極性大的雜質(zhì)去除更好。
樣品制備：
精密稱取奶粉5.0 g，加適量溫水，超聲10 min使溶解，加10%醋酸溶液5 mL，搖勻，靜置，再加水定容至50 mL，搖勻，過濾，取上清液待用。
樣品凈化：
SPE小柱：Polyclean X-HLB 60mg/3mL（貨號(hào)：9B-P001-06030）
活化：甲醇 3 mL
平衡：水 3 mL
上樣：2 mL待凈化液
沖洗：20%甲醇/水溶液 3 mL
合并上樣流出液與沖洗流出液，再加水定容至5 mL，作為待測(cè)溶液。
HPLC測(cè)定：
色譜柱：Titank C18 5μ 250 × 4.6 mm（貨號(hào)：FMG-5560-E0NU）
流動(dòng)相：0.1 M K2HPO4溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至5.6）為流動(dòng)相A；乙腈為流動(dòng)相B
流速：1 mL/min
進(jìn)樣體積：5 μL
檢測(cè)波長：260 nm
溫度：常溫
梯度：
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時(shí)間(分鐘) |
流動(dòng)相A(%) |
流動(dòng)相B(%) |
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0 |
100 |
0 |
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8 |
100 |
0 |
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25 |
95 |
5 |
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27 |
75 |
25 |
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40 |
75 |
25 |
方案三
LC/MS測(cè)定：
色譜柱：Titank C18 5μ 250 × 4.6 mm（貨號(hào)：FMG-5560-E0NU）
流動(dòng)相：10 mM 乙酸銨，5 mM 碳酸氫銨（用乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.6）為流動(dòng)相A；甲醇為流動(dòng)相B
流速：0.8 mL/min
檢測(cè)器：質(zhì)譜
梯度：
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時(shí)間(分鐘) |
流動(dòng)相A(%) |
流動(dòng)相B(%) |
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0.0 |
100 |
0 |
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3.5 |
100 |
0 |
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10.0 |
80 |
20 |
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20.0 |
80 |
20 |
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21.0 |
100 |
0 |
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35.0 |
100 |
0 |
以上用柱，如果分離度太大想縮短時(shí)間，也可根據(jù)自身情況采用:
A. Titank C18 5u 150*4.6mm(貨號(hào)：FMF-5560-EONU);
B. Titank C18 5u 100*4.6mm(貨號(hào)：FMD-5560-EONU);
