一、實驗目的

本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC 法作為分析方法，檢測食品中赭曲霉毒素的殘留。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用， 操作簡便。

二、實驗目標物

赭曲霉毒素(CAS:303-47-9)。

三、應用范圍

本方法適用于糧油中赭曲霉毒素 A 殘留的 HPLC 檢測及確證。

四、參考標準

GB5009.96—2016《食品安全國家標準 食品中赭曲霉毒素 A 的測定》。

五、實驗材料

廣州菲羅門(FLM) Polyclean X-MAX 150 mg/6 mL(貨號：9B-P003-06150)。

六、實驗方法

1、樣品提取

珍珠米

準確稱取粉碎好珍珠米 5.0 g 置于 50 mL 離心管中，加入 25 mL 提取液（0.1mol/L 氫氧化鉀溶液：甲醇：水=2:60:38），于振蕩器振蕩提取 20 min，4000 r/min 離心 5 min，取上層液 5 mL 備用。

 

醬油

準確稱取醬油 5.0 g 置于 50 mL 離心管中，加入 20 mL 提取液（同 1.1），于振蕩器中提取 20 min，4000 r/min 離心 5 min，取 5 mL 提取液備用。

 

2、SPE 柱凈化

(1)活化：Polyclean X-MAX 小柱使用前用 5 mL 甲醇活化，3 mL 水，3 mL 提取液（同 1.1）平衡。

(2)上樣和洗脫：取 5 mL 備用液過柱，棄去流出液；分別加 3 mL 淋洗液(0.1mol/L 氫氧化鉀溶液：乙腈：水=3:50:47)，3 mL 水，3 mL 甲醇淋洗小柱，棄去流出液， 抽干小柱；用 5 mL 洗脫液(甲醇：乙腈：甲酸：水=40:50:7.5:2.5)洗脫，收集洗脫液（整個上樣、洗脫過程控制流速在 1 mL/min 內(nèi)）。

(3)上機測試：洗脫液于 50 °C 下用氮氣吹干，用 1 mL 初始流動相（2 %乙酸水： 乙腈=50.5:49.5）定容，經(jīng) 0.22 μm 濾膜過濾，供上機測試。

 

3、HPLC 條件
設備：Waters Alliance 2695

色譜柱：SuperLu C18 (4.6 mm×250 mm,5μm)，也可用其它規(guī)格 C18 柱檢測器：Waters 2475 熒光檢測器

檢測波長：激發(fā)波長 333 nm 發(fā)射波長 477 nm 等度洗脫： A：2 %乙酸水 B：乙腈=50.5：49.5 洗脫方式：等度洗脫, A : B=50.5 : 49.5

流速：1.0 mL/min

進樣體積：20 μL

1、4.0 μg/kg 食品基質(zhì)中赭曲霉毒素的添加回收結(jié)果 表 1 4.0 μg/kg 食品基質(zhì)中赭曲霉毒素的添加回收結(jié)果

2、 添加水平為 4.0 μg/kg 赭曲霉毒素檢測的液相色譜圖

七、實驗結(jié)果
圖 1 添加水平為 4.0 μg/kg 赭曲霉毒素檢測的液相色譜圖